Nhựa sưng tấy hoàn toàn
Cân 2,0 g nhựa Wang trắng trong ống phản ứng sạch và khô, thêm 15 mL DMF, kích hoạt ở nhiệt độ phòng khoảng 30 phút.
Lấy axit amin đầu tiên
Ở nhiệt độ phòng, lọc dung môi từ bước trước qua lõi cát và thêm 1 mmol 5 mol C Axit amin đầu tiên ở cuối, DMAP dư 5 mol, DIC dư 5 mol, DMF Do phản ứng ở nhiệt độ phòng dung môi 3 h. Sử dụng sau khi phản ứng kết thúc Rửa DMF 4 ~6 lần, mỗi lần 5-6 lần mL. Sau đó thêm một lượng pyridin và anhydrit axetic thích hợp với tỷ lệ thể tích 1:1 và phản ứng trong 30 phút. Sử dụng sau khi phản ứng kết thúc Rửa DMF 4 ~6 lần, mỗi lần 5-6 lần mL. (tác dụng: Chặn các chấm nhỏ hoạt động trên nhựa rỗng không phản ứng.)
Fmoc Sự ra đi của nhóm bảo vệ
Loại bỏ dung môi ở bước trước bằng cách lọc hút và thêm 10 mL dung dịch piperidine DMF 20%. Dung dịch được thêm vào nhựa, N2 Khuấy 10 phút Cuối cùng, lọc dung dịch và thêm 10 ml dung dịch piperidine DMF 20%, N2 Thổi và khuấy 5 phút Sau đó lọc ra dung dịch và lặp lại thao tác này hai lần. DMF Rửa 4 lần, rửa 2 lần bằng metanol, mỗi lần 5-6 lần mL.
Thử nghiệm tác dụng loại bỏ ninhydrin
Lấy một lượng nhỏ nhựa, rửa ba lần bằng metanol, thêm ninhydrin, KCN, Mỗi lần một giọt dung dịch phenol, Gia nhiệt 105 độ –110 độ trong 5 phút, Chuyển sang màu xanh đậm là phản ứng dương tính, cho biết quá trình loại bỏ đã hoàn tất và có thể thực hiện bước tiếp theo của phản ứng.; Nếu nó không màu, điều đó có nghĩa là nhóm bảo vệ chưa bị loại bỏ hoàn toàn và thao tác hủy bảo vệ trên cần phải được lặp lại.
Sau đó loại bỏ axit amin thứ hai và nhóm Fmoc Protection
Cân lượng dư gấp 3 lần C Axit amin thứ hai ở cuối, HBTU dư 3 lần và HOBT dư 3 lần. Trong ống phản ứng, thêm lượng DMF thích hợp. Sau khi dung dịch hòa tan hoàn toàn, thêm DIEA mol dư 10 lần (tinh khiết), Phản ứng ở nhiệt độ phòng 40 phút, sử dụng DMF Wash 4 ~ 6 lần, mỗi lần 5-6 lần mL. Lấy một lượng nhỏ nhựa sử dụng Kiểm tra bằng thuốc thử phát hiện ninhydrin và nó sẽ không màu, sau đó thêm 10 mL 20% dung dịch loại bỏ piperidine DMF Fmoc, Thực hiện hai lần trong 10 phút, 5 phút, sau khi sử dụng DMF Rửa 4 lần, rửa 2 lần bằng metanol, mỗi lần 5-6 lần mL. Lấy ra một lượng nhỏ nhựa sử dụng Sử dụng thuốc thử phát hiện ninhydrin để phát hiện. Nếu phát hiện có màu xanh lam, bạn có thể tiến hành bước tiếp theo của phản ứng.
Bằng cách tương tự, lặp lại bước 2.6 cho đến khi tổng hợp được N Loại bỏ axit amin cuối cùng ở cuối Fmoc Protect base, sau đó để ráo.
Đổ nhựa và tách và phát hiện sản phẩm nguyên chất
Cuối cùng, sử dụng dung dịch cắt axit trifluoroacetic (95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O) Cắt 2 giờ, Lọc dung dịch phản ứng bằng cách hút và thu được dung dịch axit trifluoroacetic của polypeptide. Làm khô dịch ly giải bằng nitơ càng nhiều càng tốt, kết tủa bằng ete, ly tâm và sau đó rửa bằng ete trong 3 giây. ~5 lần thu được chất rắn màu trắng. Sau khi hòa tan trong nước tinh khiết, HPLC Khử muối và tinh chế, làm đông lạnh{11}}khô và kết tủa các tinh thể, lấy một lượng nhỏ MS phân tích.